[問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?

[NoahArk (小空)]

想請教各位大大，最近在使用Trizol抽小鼠RNA，
吸光值260/280都在1.3-1.6左右，大部分都在1.3到1.4左右，
我抽RNA層的總量抽差不多一半，吸光值260/280還是很低，老師說至少要1.8以上
下面是我的操作流程，是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ
1. 動物組織秤50mg，先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積 在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎
2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻，移至1.5 ml 滅菌過的離心
管。
3. 樣品在室溫靜置5分鐘。
4. 加入200μl氯仿(chloroform)，震盪混勻15秒，室溫靜置15分鐘。
5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。
6. 離心後會分層，小心取上清液至新的滅菌過離心管，RNA在此層。
7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol)，pipetting混合均勻。
8. 室溫靜置10分鐘，以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。
9. 使用tip吸取上清液
10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol)，震盪混勻樣品。
11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。
12. 使用tip小心吸取酒精後，在laminar flow操作台風乾
13.  加入30μl ddH2O 回溶，pipetting 10-15分

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※ 編輯: NoahArk (125.227.200.221 臺灣), 06/30/2022 13:52:40
推 camphor0614: ddH2O? 應該用DEPC水回溶吧
推 leptoneta: 酒精可以多洗幾次 環境夠乾淨用滅菌水回溶也無妨
推 pent: 水層不要太貪，盡量不要吸到白白的，試看看