[求救] IHC

[gto33456789 (太人生了)]

大家好

最近把自己表現出來的蛋白質 給生技公司打完抗體

開始染IHC

用的是biogenex immunohistochemistry KIT

之前的問題解決了

( 把生技公司附上的兔子normal serum 改成 commerical goat normal serum)

就不是整片陽性singal了
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但現在又出問題了

我的target cell會鎖定在軟體動物的神經上的病毒

但現在不管是染(跑PCR病毒陽性片或陰性)的病理切片

在神經的細胞上都有些許的訊號

導致現在無法確定這抗體的專一性

請問我接下來該如何trouble shooting..
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另一個問題是

我的ㄧ抗是rabbit anti-我的protein

而我的二抗是commerical的KIT裡面的

為什麼再blocking的時候, 放rabbit serum

整片就都上陽性

而改用goat serum就比較正常

照道理我的組織切片不會有兔子血清裡的任何抗體給結合上阿


謝謝大家

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→ blence: 你一抗是rabbit anti-protein,二抗不就是xxx anti-rabbit
→ a90648: 你一抗是rabbit 又用rabbit serum blocking?!
→ a90648: 二抗下去當然全部中獎阿....
→ gto33456789: = = " 是的..
→ gto33456789: 它那張抗體公司的表就叫我用來稀釋一抗與當serum阿..
→ coswater: 如果病毒確定不會出現在其他動物，可以找別的物種切片
→ coswater: 當做negetive control，然後找一片確定有病毒的軟體神經
→ coswater: 切片，當作positive，比較看看兩者的差異
→ gto33456789: roger that