[求救] PCR negative control鬼打牆

[jiuen217 (Pan)]

各位大大好

前天我做PCR的時候，發現negative control有band出現

所以我為了想知道是哪邊出的問題，昨天就測試了幾個negative control

但是結果卻讓我怎麼想都想不通


圖片如下:

http://ppt.cc/YPVH

PCR做法我是將bf和dNTP跟酵素先做pre-mix，再分到其他管

水和引子是一管一管加


一個月前我測試primer condition的時候

用A引子做的negative control跟第二組一樣

但是同樣的reagent用其他引子做negative control就沒問題


這個月做的時候，水已經換新的了(跟一個月前的水不同)

也是前幾天做PCR，用別的引子當negative control就OK

到了前天，用A引子做negative control就不行

但是如果是稀釋的A引子汙染的話

第四組用新的水做negative control就又OK....


而且第一、二組的band還長得不一樣

我真的搞不清是哪裡出問題了....


請大家救救我~~~謝謝






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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.25.92.108
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1421373833.A.964.html
推 scherzoinb: 就圖中的1，4，我會說水有污染，因為4是正常的，
→ scherzoinb: 不妨多作new A primer+new ddH2O，也要是沒有band。
→ scherzoinb: 圖3，沒有band，只能說沒有primer可以夾出來的東西，
→ scherzoinb:  不妨多作old B primer+new ddH2O，也要是沒有band。
推 tynse71864: 同一樓 做一個new primer+new H2O
→ blence: (1,2)都有東西,所以水有問題,(3)不同primer效率不同難比較
→ blence: 我覺得標題講internal control好像怪怪的
→ eric2853: 應該是negative control吧
推 ljii: 害我看到internal control就覺得是RT, 進來才發現不是...
Sorry打錯，已經改好了
謝謝大家的建議，我會再試試看
※ 編輯: jiuen217 (163.25.92.108), 01/16/2015 13:44:56
推 skyken10: 我好奇你的樣本是原核or真核？
→ jiuen217: 真核，是human的