[方法] Bacterial artificial chromosome (BAC)

[shiningspark (阿冠)]

請教各位，
最近可能需要用 BAC 來 clone 100 kb 左右的 genome，
現在手邊只有 DH5alpha 跟 TOP10F' 這兩支菌，
各位用過這兩支菌做 electroporation 嗎?
100 kb 左右的 plasmid 電進去的效率高嗎?

查到 DH5alpha 做 electroporation 好像 plasmid size 上限也只能到 10 kb 左右，
一般建議是用另外一隻 DH10B，比較會吃大 size 的 plasmid。

但手邊的 TOP10 好像跟 DH10B 基因型很相像，
如果 TOP10 就可以用的話，也能省下一筆錢跟時間。

另外，對這兩支菌來說，電壓一般都使用 1800 V 左右嗎?

希望有經驗的前輩們給點意見囉，
謝謝！ orz

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※ 編輯: shiningspark (220.135.246.236), 02/02/2015 21:54:53
推 ljii: 標準是作DH10B沒錯, TOP10也可以, 我都用過, 都沒問題
→ ljii: 我的BAC 150-200kb都有
→ ljii: 不過我還不曉得DH5a 吃不下10kb, 因為我試過是可以的, 我的
→ ljii: construct 30kb, 存在DH5a, 之後再prep也沒問題
→ ljii: 我想只是效率問題吧, 而效率問題根本沒差, 成功有一個clone
→ ljii: 吃進去, 就可以作stock, 無限放大了
→ shiningspark: 謝謝囉, 可能看到 heat shock 的資料才是 10kb 吧
→ shiningspark: 沒錯, 總之想辦法把效率提高就是了