推 Ianthegood: dapi應該是怎麼染都會進去的東西 你要不要確定染劑ok 02/04 09:17
→ williamyang: protoplasts有細胞壁?? 02/04 09:36
→ treelove: 印象中是沒有細胞壁 02/04 10:24
→ treelove: 染劑是跟別人要來的,應該是沒問題 02/04 11:08
大家好
小弟有protoplasts染細胞核的問題想請問一下
我目前是採用BiFC 方法看protein和protein間的interaction
用Leica confocal microscopy 觀察
目前遇到的問題是
不管是用Hochest 33342(10mg/ml in ddH2O) 或是DAPI (2mg/ml)
似乎都染不進細胞核
我是取1ul Hochest or DAPI + 9ul的protoplasts sample,放到玻片上30分後觀察
可是有染到的細胞很少,而且有染到核的卻看不到YFP螢光(positive control)
(簡單說,有發YFP螢光的細胞染不到核,可我就是要有螢光的 ORZ)
我下plasmid的總量20ug,而我也試過不加plasmid,但一樣染不進核中
也想過換不同濃度,但只是背景提高亮度or 變暗而已
想請問有經驗的大大們,問題出在哪裡呢?
我有想過會不會是細胞太健康所以很難進核? 還是plasmid下的量太多排擠到染劑?
(我的plasmid表現在核中)
謝謝~
(p.s.這方式我是照以前的學長留下來做的,但到我手上不知道為什麼會染不出,
問過以前的學長姐說方式也沒問題,so....)
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