[求救] 冷凍切片-brain會浮起來

[pent (有人試我的密碼，幹)]

brain tissue 打tracing 進去，做circuit 追蹤
PBS perfusion 20ml, 4% PFA 10-15ml吧，再浸泡4% PFA 4小時內
換成30% sucrose直到它沈下來。
做成冷凍塊，切20um
貼在有silane coating的slide上 (買的)
之後再wet chamber 先用PBS wash, 4% PFA再固定
但是通常到PBS wash這一步，就會有點飄起來的感覺，
到PFA後，有時候就整個浮起來了

我的問題是：
1.再切片時，剛切下來的冷凍slice，是把再室溫下的slide
直接黏上slice嘛？
看前人的問題，有提到要向再做paraffin section 一樣，
像在水裡把石蠟切片貼上去那樣的去貼冷凍貼片。
但是，我完全想不出來這要怎麼做？
我是慢慢的，就像slide從垂直於桌面，到45度，然後啪的一聲，貼上slice的檯子
然後slice就會黏上slide，但是有時候會有泡泡在組織和slide之間，
該怎辦？
2. 為啥會浮起來？我發現切10um有好一點，比較不會浮，
但是要tracing，每一片都切10um， 片數會很驚人......
有些貼片和slide頂多只有一、兩個小泡，他還是浮起來...orz

Thanks


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→ short945: Brain本來就不容易黏，再加上很厚。如果有某些原因必須
→ short945: 要用冷凍切片的方法，那就要找更高級一點的玻片
→ short945: 例如superfrost-plus-gold-slides
推 hchung: 我之前的作法是在玻片上用毛筆抹上一點點水，像畫水彩一樣
→ hchung: 再把切片貼上去，就會很平。試試看吧~玻片是自制的gelatin
→ hchung: coating