[求救] 請問用trypsin是否合適將貼附的PBMC分離

[soddaaa (嗄)]

為了要將PBMC從Corning plastic well打下來
以進行後續的RNA抽取步驟(使用Roche RNA purification kit)

PBMC貼附後1天便加入trypsin(有warm到37度)
但等了5min後細胞還是有一半都還貼附在盤子上
會不會是因為我的細胞數量太多的關係而trypsin的量不夠？
(我的PBMC量為1X107在6cm dish trypsin加0.5ml)

另外由於PBMC型態的關係
很難分辨到底是detach的圓圓小細胞還是原本就是圓圓但是是貼附的PBMC

新手發問
謝謝各位 <_ _>



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推 jabari: 你只是要抽RNA的話.. 用刮刀刮一刮加RNALater直接收了
→ soddaaa: 主要是所使用的RNA isolation kit的關係...之後步驟是加l
→ soddaaa: lysis buffer+PBS所以會需要先將細胞打下來
推 scherzoinb: 我的做法是︰把培養液吸乾，加PBS洗一下細胞，吸乾
→ scherzoinb: 再加一些PBS，用刮刀把細胞刮下來，收在eppendroff，
→ scherzoinb: 再加lysis buffer+PBS 到kit說明書上的量~~~
→ scherzoinb: 然後就開始跑流程~~~
→ soddaaa: 喔喔謝謝！這樣的作法是因為PBMC很難用trypsin打下來嗎？
推 michealking: 刮刀+1 另外您的trypsin 濃度多少？ 通常細胞說明書
→ michealking: 會有建議濃度
推 nprotei: PBMC照理說不會那麼貼? 要不要用用看沒coating的plate