[求救] 總酚含量的測定（分光光度計的使用方式）

[Telcontar (皮皮)]

小弟不知道是不是自己的操作過程錯了，

因為我是照別人跟我說的做，但小弟一直無法重現文獻的實驗結果

請各位幫我看看，謝謝



我是使用總酚含量的測定(Folin-Ciocalteu的試劑測定)，先做檢量線

方法：配置不同濃度的沒食子酸(0~100μg/ml)各取30μl，

      加入100μl 2N Folin試劑，接著加入2ml的水，
　　　
　　　最後再加入1ml 20%碳酸鈉，放置兩小時後測定其在750nm的吸收度


分光光度計的方法他是跟我說：

　　　blank(當背景)：放入sample + 2ml的水 + 1ml 碳酸鈉　（歸零）

      實驗組：放入sample + 100μl Folin試劑+2ml的水 + 1ml 碳酸鈉


請問小弟操作分光光度計有錯嗎？因為做出來的檢量線Ｒ^2=0.9993

但以未知的萃取物換算相對濃度的時候卻跟文獻不一致（差很大）

因為分光光度計他是口頭跟我說的，所以我也不知道我是不是做錯了，

還是背景要放甲醇（我是用甲醇配沒食子酸的）或去離子水歸零？

網路上似乎也沒有詳細的說明分光光度計的使用方式，如果有的話請告知我，謝謝

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→ Ianthegood: blank也要有meoh跟folin
→ Telcontar: 不好意思，小弟知識淺薄，如果加Folin那要怎麼比色？
→ Telcontar: 如果加了請問要怎麼比較顏色的變化？謝謝
→ Ianthegood: 就看顏色變多少啊
→ Telcontar: 對不起，真的不太懂@@ 這樣blank和其他樣品槽差在哪?
→ scherzoinb: blank：sample + 水 + 碳酸鈉 + meoh 　
→ scherzoinb: 應該是這樣吧~~~
→ Telcontar: 樣品本身是溶在甲醇中
推 payton103075: Blank是把實驗組的sample取代為溶sample的溶劑
→ JIM7809230: Gallic acid 溶水也可