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大家好~打給後 我是鳳梨田中的小魯妹 有件事困擾我很久(三個月) 目前擔任助理的我 幫老闆跑colony PCR的膠 marker 總是跑得很奇怪 之前的實驗室從來沒遇過這種怪事 以下是我的實驗條件 塗盤-->挑單一菌落-->Colony PCR(Product size: 0.8kb) Gel %: 1%(將別人做Gel用剩留在錐形瓶中的,重新微波做新的一片 我們實驗室有夠省) buffer:1X TBE 100V;25min 結果跑出來變這樣 (同樣的情況發生很多次,但有時候不會) http://ppt.cc/eZeD lane2,9是marker 其他是sample marker只有一罐其他人用都沒問題 我實在是找不出問題在哪 每一次跑都心驚膽跳 跑成這樣根本不能當data用 請各位大大指點指點 順手回一回 救救小魯妹 祝大家實驗順利~~ 補充說明 lane2的marker 500k 以下都跑不出來,莫名其妙的消失了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.123.85.94 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1425381191.A.B1C.html
Ianthegood: 個人覺得問題是膠...03/03 19:18
xxtomnyxx: Marker 是 commercial ready to use 的還是買 stock 自03/03 20:50
xxtomnyxx: 己配的?03/03 20:50
是commercial的
guise: sample loading少一點,marker像是被sample擠壓03/03 23:02
sample load 12 lamda marker load 3 lamda
datro: TBE不是0.5X? 有沒有戳到底啊?03/03 23:03
我們家都是用一倍的,學長姐學弟妹用了都OK
guise: lane 9看似在loading時把well戳出小洞才在中間拖一條03/03 23:12
我很小心應該不太可能
Ianthegood: agarose膠也會有sample被擠壓變形的問題嗎??03/03 23:31
※ 編輯: jaren229 (223.138.152.49), 03/04/2015 07:51:32
chaunen: 遇過 似忽是loading dye配方不同 marker和sample之間空一 03/04 07:55
chaunen: 格 03/04 07:55
keithshih: buffer倒太多gel跑到浮起來了,稍微蓋住膠面即可,妳如 03/06 00:10
keithshih: 果跑1hr說不一定1kb的band也不見了 03/06 00:10
keithshih: smear應該是熔膠不完全或倒膠時太冷已經有結塊的關係, 03/06 00:17
keithshih: 最後如過跑100的ladder膠的濃度可以在提高點,不然100- 03/06 00:17
keithshih: 1kb的band跑不開不漂亮 03/06 00:17
lyu0001: 微波重複使用很常見阿 可能是製膠槽或凝膠有雜質 03/07 15:59
satasumi: 膠的問題,沒有凝好~ 03/16 08:05
yfw: 看起來是膠的問題 要小心loading時不要搓破well 05/04 19:15