推 gps0110: 少量的imidazole是要減少non-specific binding 03/21 23:17
推 gps0110: 你target protein的表現量高嗎？如果只有一點點 可能都被 03/21 23:19
→ gps0110: 你lysis buffer中的imidazole compete掉了 03/21 23:19
推 yuyu219: 你有先把bead的酒精去掉嗎？buffer的pH很重要，Ni-NTA應 03/21 23:57
→ yuyu219: 該是Qiagen的，protocol應該有寫得很詳細。如果你的東西 03/21 23:57
推 kg9101266: 我們用Talon Bead 一樣是抓His Tag 03/25 00:42
→ kg9101266: 讓你參考一下 Lysis bf. 不含imidazole 03/25 00:43
→ kg9101266: binding bf.= Lysis bf. resin使用前會先以binding bf 03/25 00:44
→ kg9101266: balance數次(如果lysis bf.含detergent balance時我會 03/25 00:45
→ kg9101266: 先把detergent拿掉(應該是不影響 只是怪習慣而已) 03/25 00:46
→ kg9101266: wash bf.只含5mM imidazole 有時視蛋白種類還會再降 03/25 00:47
→ kg9101266: Elution才使用高濃度(e.g. 100~500mM)imidazole洗脫 03/25 00:49
→ bill00202000: 謝謝各位答覆，小弟我會在try看看 03/28 15:30