[求救] BCA蛋白質定量

[gunny362 (B勒)]

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題

若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除

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想請問
我欲利用強鹼(10N NaOH沸水浴30 min)萃取我樣品中的蛋白質,萃取完後paper說要以HCl中和,我用滴定的方式滴我的樣品,但因為使用的是強酸中和,一不小心就會爆衝,得到的ph會變成6-9之間,想請問想請問不同ph對BCA assay測量可溶性蛋白的影響,如果可以我還真希望可以以強鹼來直接測BCA吸光值...

還有一個問題~就是因為我的是固態樣品,強鹼溶解過後還是有很多固體殘留,如果我在萃取之後拿強鹼蛋白溶液去離心,水溶性蛋白會不會被離掉阿?如果以強酸進行中和後,會被離掉嗎?



請各位大大幫幫我

沒連假...趕實驗中...

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推 caesar0926: BCA定量的是鹼性環境中作用，可以去查查看說明書會受
→ caesar0926: 那些物質影響定量結果。 離心的話應該是沒問題
→ caesar0926: 收細胞後定量前也會離心再取上清夜去定量。
→ caesar0926: 以上有錯請大家指正，謝謝!! 祝你實驗順利!!
→ Ice9: 生物中的酸鹼中和，從來都不是以高濃度開始。你要的是稀釋的
→ Ice9: HCl 來達到中和的目的。如果該 paper 没寫清楚作法，問作者
推 Ice9: 另外，以 10N NaOH 來處理蛋白……這是什麼 protocol？
推 alex53001: 同樓上 想想瞭解10N NaOH萃取蛋白的protocol
推 rubidus: trouble shooting 那邊有寫強鹼強酸會減緩變色  thermo的
→ rubidus: 不過也沒有寫多少叫強  我自己是常用 pH=8.8 的NP40