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請教各位版上的朋友 我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7 但我壓片出來後不管是多少濃度的Ab 都看不到band transfer 都確定protein 都有轉印到NC membrane上~~~ 而且還會有一點一點黑色的雜點~ 如下圖 http://ppt.cc/sN61 而我的條件如下: blocking 5% milk 1.5hr 1抗是1:300 o/N TBST wash 10min x3 2抗是 1:10000 1hr TBST wah 10minx3 請各位有甚麼解決之道呢?? 謝謝各位的協助^^ 我的一抗是santa cruz這間廠牌的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 163.15.175.165 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429256760.A.C94.html
Bows: 換一家抗體 04/17 15:47
Bows: santa的優點只有便宜而已 04/17 15:48
kgwu: 建議換廠牌..以前用Caspase3(santa)怎麼做都做不出來.... 04/17 16:17
jabari: 聖誕老公公是有名的抗體樂透商 04/17 16:18
blence: SC很愛比較有無oe immunogen或FL來確認Ab效果,可是看到隔 04/17 16:22
blence: 壁的control lane連個band都沒有,不就是宣告說這Ab不好用 04/17 16:24
t123401221: 那請教各位有雜點是甚麼原因造成的呢? 04/17 16:30
t123401221: 和下面那一張有些區塊都是白色的???? 04/17 16:30
tz2733: blocking為何要1.5h 感覺有點太久 另這三支抗體我作起來是 04/17 19:05
tz2733: 整張都是雜band 建議換牌吧 04/17 19:05
greendeer: 黑點應該是牛奶或wash solution髒掉了 04/18 12:17
greendeer: 白色區塊是ECL反應過度,已經耗掉所有2抗活性,就會剩 04/18 12:21
greendeer: 白色,其實那是沒有訊號。你看旁邊都是黑色就知道訊號 04/18 12:21
greendeer: 很強,猜想你的二抗大概也搖晃的不均勻 04/18 12:22
stone1105: 換抗體 04/18 20:09
tynse71864: 抗體吧 但我覺得blocking時間應該還好 04/19 16:48
tynse71864: 有時後來不及我都會丟4度 o/n 04/19 16:48
kg9101266: 滿天星是不是因為抗體沉澱的關係?我以前也曾經遇過 04/25 21:35
kg9101266: 但不知道該怎麼解決 求高手幫解>< 04/25 21:36