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我想請教對repoter assay熟悉的人, 因為我們實驗室要做promoter reporter 如下圖 http://ppt.cc/~qEE 在promoter後面接mCherry的基因 (或是GFP也可以) 然後把promoter置換成我們研究的promoter 之前實驗室有買commerical的plasmid 但可用的切位少之又少 (像是recommend的切位在insert中也有切點) 很多限制 不知道版上有沒有人有推薦的plasmid 前陣子挖了很多資料 但好像很少是可以置換promoter的 plasmid 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.183.217 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1429610838.A.E7A.html
Bows: luciferase? 04/21 18:59
jasmineapple: 不是 是想看mCherry or GFP的表現 因為想在照片 04/21 19:06
jasmineapple: 的形式來看。但luciferase應該只能得到一些量化的值 04/21 19:07
jasmineapple: 老闆是想看美麗的圖片 哈哈 04/21 19:08
blence: 再怎麼麻煩,用site-direct就可以變出你想要的RE site了 04/21 19:27
jasmineapple: 是這樣沒錯,但是是想到有很多切位的話,就可以給 04/21 21:56
jasmineapple: 之後很多實驗用了 04/21 21:56
blence: 其實site-direct之後接MCS進去,就能廣泛使用了阿 04/21 23:59
Ianthegood: promoter切掉後做blunt再做t-tailing 做成t vector 04/22 10:32
Ianthegood: promoter直接p出來就接進去 04/22 10:32
jasmineapple: 請問sticky end產生後如何變成blunt end?thx 04/22 16:17
Ice9: 用 Gibson Assembly 的方式來製作呢?聽說不需要 RE sites。 04/24 02:08
Ice9: 我個人没用過。 04/24 02:09
alexflybaal: 之前用過pGL4,基本上就是MCS接luciferase reporter 04/24 11:29
Ianthegood: t4 dna polymerase 04/24 14:14
satasumi: pDL LacZ 01/05 06:39