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最近教授說要做細胞的native page,原本預設實驗步驟是將收好的細胞加入lysis buffe r後去跑native page,跑完後接著加抗體直接轉western,不過結果出來都看不到什麼東 西,想請問幾個可能的原因 1.Lysis buffer中的鹽類是否要去除,若要去除鹽則該怎麼配製? 2. 是否有其他方法可以裂解細胞。 3.跑膠所需要的蛋白濃度是否要改變,目前我是依照實驗室跑western的濃度(50ug/ul)跑 的。 4.有什麼我做錯的地方或是有跑過細胞native page的高手跪求指導 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 110.26.13.74 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1432711035.A.674.html
huangsw: 我想知道的是你每個lane下的量, 但是你給的是濃度... 05/27 23:02
Ice9: 你 lysis buffer 中的內容物和其濃度順便標一下吧。 05/28 21:32
Ice9: huangsw 網友的問題也很重要。另外你的 spacer 寬度多大? 05/28 21:33
melaleuca: 所有東西都要完全乾淨沒有被任何detergent污染 就跑的 06/27 21:21
melaleuca: 出來了 06/27 21:21