[求救] 關於IMR32的一些問題

[kakutsuchi (想要重新開始~~~)]

關於IMR32我想問一下這邊有沒有人有做過這株細胞
因為碰到蠻大的問題
所以上來求救


我的培養條件

  DMEM(low glucose)
+ 10% FBS
+ 2mM L-glutamine,
+ 1% NEAA
+ 1% P/S

細胞狀態可以養滿~
但鏡檢的時候會有不少漂浮的細胞(或是細胞碎片?)

繼代的時候1盤只能分成2盤
因為回load太少的話~細胞會長的很慢~
就算是1盤分2盤的狀態
通常長滿還是要4天
而且2天時候需要換一次medium

繼代方法沒有用typsin
直接拍一拍他就掉下來了
((超容易飄

請問這樣的狀況是正常的嘛?
世界消耗medium的阿~

而且這樣一盤75T養滿的狀態
全部打下來
總共也才 4~5 X 10^6而已
請問有大大們養過這株細胞嘛?
這樣的狀態是正常的嘛?

懇請大家幫忙
謝謝大家了!!

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 134.208.25.200
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1434439938.A.93C.html
→ leave1027: 我有養過這株細胞、但我DMEM是ㄧ般沒有low glucose
→ leave1027: 因為這細胞會有像觸角會伸出、所以可能看起來還沒滿盤
→ leave1027: 但其實他已經滿盤
→ leave1027: 如果你需要大量細胞、就是多種幾個flask囉！還有他飄
→ leave1027: 來飄去表示狀態已經不是很好了
→ leave1027: 我以前做一次實驗也是分個8～10 flask才夠
→ leave1027: 希望有幫助到你
→ stone1105: 我也是用正常的glucose，不過容易飄好像正常
謝謝兩位!!!
那如果我今天要打在裸鼠上面的話

medium是不是要去掉p/s比較好

我查了一下paper
好像一隻裸鼠都需要打到至少 6 X 10^6 ~  1 X 10^7  左右!
這樣子超消耗75T flask的阿Orz
※ 編輯: kakutsuchi (134.208.25.200), 06/17/2015 17:36:53