[求救] MTT顏色超淡

[clownegg (丑蛋)]

小弟目前單純養細胞 沒有給藥

條件是96well每個well一萬顆

細胞是H1299

Medium是 RPMI1640 + FBS + PSN + pyruvate


流程是

Seed完 等24h貼壁

換成有MTT的Medium(0.5mg/mL) 等4小時

換DMSO溶解

結果顏色超淡的


自己有試過改變細胞數量到兩萬 還是很淡

MTT開新的來用 還是很淡


目前懷疑是算細胞的機器不準

或是在96well 細胞長不好

畢竟seed完看起來完全沒有一萬顆的感覺



總之 很多疑點自己也在排除中 如果有大大也遇過MTT顏色很淡的情況

可以分享一下解決的方法嗎  謝謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.9.48
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1435296915.A.0BC.html
→ Ianthegood: 你有讀過吸光值了嗎
之前有  但是非常低幾乎都在0.3以下
所以後來只看顏色就覺得不行 最近的都沒有測
※ 編輯: clownegg (140.120.9.48), 06/26/2015 14:19:36
→ Ianthegood: 就算低 有correlation嗎
correlation是?  我是用elisa reader 好像沒有校正這個步驟
※ 編輯: clownegg (140.120.9.48), 06/26/2015 14:28:26
→ Ianthegood: 你的吸光值跟細胞數量有沒有正相關
→ zoe77101y: 拍一下顏色看看
→ chvkimo: MTT 5mg/mL stock 壞了嗎?  還是已經是新配的?
→ chvkimo: 我近期也有在用 H1299做MTT. 但我是用2000 cell/well