→ milkpa: 直接刮，看比例的話相對值不會變 08/12 00:47
各位板友們大家好
小弟目前要萃取 adherent cells 內的lipid
然後去跑TLC片判別不同lipid 的比例
目前要用的是Fotch 的方法
簡述如下:
加入MeOH / CHCl3 (2:1,v/v)
vortex 20mins後加入1/5上述體積的0.9% NaCl
之後離心500g,10mins
大部分的paper跟protocol都是針對liquid(like serum)/tissue/suspension cell
但如果是adherent cell
也不可能直接把MeOH /CHCl3 加到culture plate去刮 (plate會溶)
PBS刮下來也怕有些phospholipid 會流失
(有想過加MeOH刮,但常溫的甲醇也會溶plate)
trypsin則不很確定 因為之前拿來extract PI(4,5)P2的kit是說
請不要用trypsin打下來 否則會影響胞內phospholipid的含量
我不知道這個邏輯能否套用在現在的實驗上
其他的想法就是
1.加0.9%NaCl/ MeOH刮 收集細胞後再加CHCl3
2.PBS wash後吸乾 直接刮
我們家大部分都做protein實驗 lipid extract相關的不多
翻過很多paper/討論區 對adherent cells著墨很少
希望有經驗的板友可以提供一些方法!! 謝謝
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