[討論] Oil red O 染色

[grassshan (紙飛機啊歐歐踢欸死)]

先感謝版上大大再之前轉漬提供的資訊！！

特別一位寄站內給我詳細的大大…
（手機lag 我不小心把信刪了沒備份到，
沒辦法親自回信真的非常不好意思>_<）

再者是這次遇到紅油染色跟配置的問題～

我使用99% isopropylene 100ml +
             0.5g oil red o 粉末（購自sigma)

過程是分次逐漸加入 isopropylene
 緩慢加熱 至 60～90℃
（泡的時候顏色太深，
我就盡量把大顆粒泡散戳碎而已了…）

我有放顆磁石在中間攪拌，
稱著餘溫用濾紙過濾後，貯存於室溫之下

我通常泡完後隔天再使用。

但最近總覺得很奇怪的一點是，
學長之前留下來的oil red o最少放超過3個月
離心管內卻完全沒有雜質或是黏壁的樣子。

但我前一天剛泡完，而且過濾好的
到隔天，就會有很多顆粒出現…
（所以我用之前都會再過濾啦～）

只是好奇，
大家的oil red o 泡完大概多久才出現沈澱顆粒的呢？
而且我這樣 0.5%的oil red o濃度是不是會有影響啊…

再者是working solution的部分！
我染色前沒有再加水配成working solution
直接30min 60℃熱完直接加到plate中染色

然後烘箱60℃放置半小時

再回收oil red o （我會reuse)

除了靠近外圍的一圈比較染不到，
整格看起來的效果其實沒有很差。

想問問配置成working solution的原因是？

另外，我整個染oil red o的過程都不是在無菌操作臺中～
包括前面用福馬林固定都沒有～
昨天被學弟問 可不可以放培養箱中固定…
我不知道啊啊啊啊啊（抱頭）

當下只覺得外用福馬林進去培養箱有造成汙染的危險 就先阻止他了。
事後其實我還蠻困惑到底可不可行呢…？

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 111.70.222.104
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1439526042.A.687.html
推 ararthur: 我泡Stock沒有加過溫 直接配成3.5mg/ml in 2-propanol
→ ararthur: 劇烈vortex, stand at RT for 20 min, 0.22um filter 過
→ ararthur: 濾，working sol.則是通常當天配置 加至40% v/v in H2O
→ ararthur: 照你的做法 會有沉澱析出是很正常的 妳溫度高的時候就過
→ ararthur: 濾 降溫下來很容易就析出 這個量應該已經超出過飽和狀態
→ ararthur: 就連我室溫泡的stock放久也會有沉澱了 吸取上面飽和溶液
推 ararthur: 使用即可
→ ararthur: 另外染色在外面做就好了，以及細胞我都會常溫下固定
→ grassshan: 謝謝AR大～泡成working 之後不能reuse,但如果染的比較
→ grassshan: 好，我會想試試看～所以問問AR大，染色時間一樣，有改
→ grassshan: 變濃度的，照相起來會比較漂亮嗎？還有後續我會用95%酒
→ grassshan: 精回溶去測吸光值，也擔心中間多這個步驟會不會影響後
→ grassshan: 續測的數值…orz"
→ grassshan: ps原來我學弟有偷放進培養箱中約10min才問我…細胞果然
→ grassshan: 剛剛被我發現多了好幾件黴菌棉被～！
推 lail: 我每次用oil red o之前都會再用濾紙粗略過濾耶
→ grassshan: 我是每次都會用0.22um小飛碟過濾需要的量出來用～～
推 ithinksoiam: 每次用之前都要過濾