推 tynse71864: 我之前strip過 東西就全沒了 ˊ_>ˋ 08/14 20:02
會不會是strip太久@@?
→ blence: 你重染同一支抗體還需要strip嗎？ 08/14 20:38
因為我怕二抗影響新的一抗，所以習慣上會Strip之後再染一次，所以可以不用strip嗎?
推 moon0126: stripping的時候buffer加不夠，搖晃不均勻？ 08/14 22:22
我比較怕我用太多XD
※ 編輯: lxz (111.250.106.64), 08/14/2015 22:26:42
推 tz2733: 兩次拍攝得背景值差好多...第一次的lane3本身背景也比其他 08/16 01:47
→ tz2733: lane較亮 不知統計扣除背景值後是否有比lane2高.而第二次 08/16 01:47
→ tz2733: 拍攝背景每條lane比較一致 建議還是重作第二次條件再看看 08/16 01:47
→ tz2733: 吧 加油! 08/16 01:47
我用imageJ統計過，第一次的Lane3確實比2高，我會重做第二次的條件，謝謝^^
→ Ice9: 第一次的背景真髒？用什麼blocking的，不會是 milk 吧？ 08/16 07:30
→ Ice9: 另外，如何知道你 strip 乾淨了？可有strip後重染前的影像？ 08/16 07:31
→ Ice9: 一般測磷酸化的WB，不太建議重染。stripping 會減低磷酸化蛋 08/16 07:33
→ Ice9: 白的偵測，signal 降很多。 08/16 07:33
我是用5% BSA去blocking，Stripping是根據buffer裡說明書建議的時間去做，做過三次
確定有乾淨。
Strip後重染前？是指strip後的membrane的影像嗎？
我也在想是不是stripping造成磷酸根掉了QQ
※ 編輯: lxz (111.250.106.64), 08/16/2015 12:43:28
推 tynse71864: 我第一句就是說這個啦ˊˋ 08/17 01:16
推 icome: 不是strip造成的 第一次背景太高 不能當作result 08/21 10:26
來update一下
我後來用5% BSA配抗體，抗體用1:750，成功看到我要的結果，還沒試過stripping之後
是不是也會看到一樣的結果，但看起來應該是抗體濃度的原因。
謝謝大家:-)
※ 編輯: lxz (111.250.99.20), 08/23/2015 08:35:21
推 HaGa5566: 建議先壓磷酸化的 08/27 21:15