[討論] talon 純化蛋白

[monicatsen (monicatsen)]

嗨 大家 想要跟大家請教一下
我最近在做純化蛋白 利用E.coli的system 再用talon的resin純化 his tag protein
但因為我們家沒有gel filtration的儀器
所以我純化完後就直接用amicon的濃縮管濃縮去除離子

接著 用濃縮完的產物做in vitro demethylation
原本是預期沒有作用（當negative control,沒有催化活性的domain）
但今天測試居然能夠demethylation
可能是純化沒做gel filtration 導致蛋白不夠純造成的嗎？
還是 我的蛋白真的能夠demethylation？

謝謝


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→ Ice9: 我第一個懷疑的是construct。是點突變成的domain嗎？
→ xxtomnyxx: 試試看讓 E.coli transform 沒有表現蛋白的質體或是表
→ xxtomnyxx: 現 EGFP 之類的質體，然後做一樣的純化步驟，看產物能
→ xxtomnyxx: 不能一樣產生 demethylation 就知道是不是純化不夠了。
推 Marriott: 懷疑不夠純 先跑片sds page吧