Re: [討論] talon 純化蛋白

[monicatsen (monicatsen)]

其實 一開始就跑了SDS
除了目標蛋白60kda外 在45kda左右也有一條
因為沒有gel filtration system
目前是想用Mwco30kda的濃縮管在去離心
想問一下這個方法有辦法移除 45kda的蛋白嗎？

※ 引述《monicatsen (monicatsen)》之銘言：
: 嗨 大家 想要跟大家請教一下
: 我最近在做純化蛋白 利用E.coli的system 再用talon的resin純化 his tag protein
: 但因為我們家沒有gel filtration的儀器
: 所以我純化完後就直接用amicon的濃縮管濃縮去除離子
: 接著 用濃縮完的產物做in vitro demethylation
: 原本是預期沒有作用（當negative control,沒有催化活性的domain）
: 但今天測試居然能夠demethylation
: 可能是純化沒做gel filtration 導致蛋白不夠純造成的嗎？
: 還是 我的蛋白真的能夠demethylation？
: 謝謝

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推 abcam: 30/45kDa 分子量太近……我不認為 濃縮管是好方法
→ monicatsen: 嗨 我只想保留60kda大小的蛋白 45kda是我想去除的
→ monicatsen: 還是用50kda？
推 Marriott: 但不用太期盼會有很好的效果
→ Marriott: talon完後 再多上支MonoQ/S??
→ Ice9: 45KDa 產物是出現在什麼時候？induction期間，還是純化時？
推 gps0110: ion exchange column看看
推 icome: COMW參考用 不能保證剛好就切在那個分子量