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R&D的elisa kit 是要自己先手動coating的kit protocol裡面寫sample 要pretreat 在100ul sample+50 ul 1N HCl incubate10 min 再加45ul 1N NaOH 這個步驟是了為什麼?純粹矯正ph值嗎? 因為我sample裡面標的蛋白的濃度已經很低了 加了HCl跟NaOH會更加稀釋掉了 所以想知道加酸跟鹼是不是必須的步驟 還是可以直接用原始sample測呢?謝謝大家 -- posted from android bbs reader on my HTC_M8x https://market.android.com/details?id=com.bbs.reader -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 117.19.241.188 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1441099756.A.764.html
utadalove: 我們也是R&D system,也是自己coating,但是沒這個步驟 09/01 18:34
allthebest: 蛤 是喔 09/01 19:57
allthebest: btw 是 R&D DuoSet 系列 09/01 19:58
qiet: 要看你的目標蛋白, 可能是有和其他component有interaction 09/01 20:44
qiet: 會影響到抗體辨認才用酸去破壞交互作用吧 09/01 20:45
Ice9: 加1/2體積的1N強酸鹼下去,你不覺得這個很暴力嗎? 09/02 07:00
allthebest: 由於他protocol沒有多加解釋原因 所以我也挺煩惱 09/02 16:28
allthebest: 也沒有說不同類型的檢體是否有不同操作手段 09/02 16:31
allthebest: 決定寫信問原廠比較快~~ 09/02 16:37
allthebest: 剛跟R&D 技術員livechat 他說如果原始測的出OD 09/02 16:59
allthebest: Ok 的話,不一定要加酸跟鹼 09/02 17:00
Ice9: 我看了DuoSet kit的描述,看到它是為了使TGF-beta1成為免疫 09/02 17:00
allthebest: livechat還不錯不用等回信 只是對方打字好快..XD 09/02 17:01
Ice9: 活化狀態,以使得抗體能辨認。所以,加酸加鹼下去,就是為了 09/02 17:02
Ice9: 加酸破壞其三四級結構,曝露出epitope。然後加強鹼(有hepes) 09/02 17:03
Ice9: 中和整個溶液,免得後來的抗原抗體後應没有效果。 09/02 17:05
Ice9: 所以才會用暴力方式作用。 09/02 17:06