→ blence: 這哪是相反了，有沒有適當的control怎麼是相反 09/02 23:39
→ lb00202549: 不好意思!我用字不恰當>< 09/02 23:40
※ 編輯: lb00202549 (111.243.117.119), 09/02/2015 23:40:53
→ blence: 你把現有抗體倍率再稀釋一千倍,WB結果不就跟QPCR一樣了阿 09/02 23:40
→ lb00202549: 但是無論QPCR或是western的internal control都很清楚 09/02 23:42
→ blence: 等你用很多株細胞再來說WB與QPCR是不是一致 09/02 23:47
→ blence: 現階段的data把該抗體再多稀釋一千倍,WB就很QPCR一樣弱了 09/02 23:49
→ huuban: RNA quality OK嗎？ 09/03 00:09
推 ljii: 呃...這是常見到不能再常見的狀況了 09/03 05:50
→ ljii: 照你的說法是RNA測不到, protein測的到. 所以可以從RNA leve 09/03 05:51
→ ljii: l及protein level各去想. 各自有無數可能 09/03 05:51
→ ljii: RNA level :RNA sample quality? primer melting curve?換 09/03 05:52
→ ljii: 組primer?RNA有沒有被DNA 污染?搞不好RTPCR產物跑膠是一個 09/03 05:53
→ ljii: smear 09/03 05:53
→ ljii: protein level: 你確定你blot到的是那個protein嗎?別的lane 09/03 05:53
→ ljii: 也blot的到?有positive control嗎?(確定有表達該protein的 09/03 05:54
→ ljii: cell line) 09/03 05:54
→ ljii: 另外你的"皆有表現"也講的很含糊, western出來是一個 09/03 05:54
→ ljii: big fat band, 還是是好幾條然後剛好有一條命中你預期的分子 09/03 05:55
→ ljii: 量你就覺得是有表達?表達量跟loading control比呢? 09/03 05:55
→ ljii: 假如上面troubleshooting都作完了, 確實是RNA表達量很低 09/03 05:56
→ ljii: 但protein量高, 那可能就是有別的gene在作這個protein或是 09/03 05:57
→ ljii: 剛好作一個類似大小又類似epitope的fragment (抗體好不好也 09/03 05:57
→ ljii: 有差). 09/03 05:57
→ ljii: 最後加個不負責任的預測,因為你說你RNA的Ct很高, (高是多少? 09/03 05:58
→ ljii: 35?38?) 我會猜是你根本就是primer不好,換幾個primer試試吧 09/03 05:58
推 ducky313: 這好多原因，三言兩語也說不完...另外可能還有時間點的 09/03 10:17
→ ducky313: 問題哦.. 09/03 10:17
→ lb00202549: 請問時間點是什麼意思呢？ 09/03 11:10
→ liumang: mRNA→protein這段時間也是要考慮的啊 也許你雖然測的到 09/03 20:55
→ liumang: protein 但mRNA早就degrade掉了啊 跟你一樣是小碩一 有 09/03 20:56
→ liumang: 錯還麻煩指教一下 09/03 20:56
推 qiet: 先保證你的實驗condition是ok的再來考慮科學問題 09/03 23:42
→ qiet: RNA品質, primer/qPCR條件(是否有好的positive control) 09/03 23:43
→ Ice9: probe 是自行設計的嗎？搞不好 probe 也有問題呢。 09/04 10:34
→ Ice9: 另外，你可以先看看你的mRNA，上面有没有早夭序列…… 09/04 10:36
推 andy544asd: 蛋白如果在細胞裡面很穩定不容易降解 就算mRNA都消失 09/09 23:04
→ andy544asd: 原本的蛋白質還是不會消失阿 就頂多沒有新生成更多 09/09 23:05
推 ararthur: primer換一組吧 或許根本沒抓到 09/28 02:22