[求救] 膜蛋白的分離

[TCSSH (快樂就好)]

不好意思，有收尋過板上文章和pudmed文獻都沒有看到類似的文章，

我現在的實驗是將肺組織的gp91phox從細胞膜上分離，使用Thermo的Mem-PER Membrane

Protein Extraction Kit，我照他的protocol去分離組織上的膜蛋白並跑western blot，

但是奇怪的是分離出來的細胞質蛋白比細胞膜多，可是我是分離膜蛋白(已確認沒有分錯管

，也已重複實驗四次)，老師說有可能是老鼠犧牲後組織放在負80度C冰箱，

導致細胞破損，我怎麼樣都找不到相關的文獻，不知道是不是真的有影響?有沒有人有這

樣的經驗？感謝

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★ crazydog  好啊!! 

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推 supray: user guide的Troubleshooting 第一點有試過了嗎?
→ supray: http://0rz.tw/13dTe
→ TCSSH: 所以我要減少取質的步驟中incubation的時間??
推 supray: Permeabilization可能不完全   增加incubation時間
→ supray: 或者做個homogenization看要用磨的,凍的,還是過針筒都能試
→ supray: 因為組織非均質狀態,要讓所有細胞都開洞,讓細胞質流出
→ supray: 條件可以再試試
→ TCSSH: 我有用組織均值機去磨碎了 那我增加他的作用時間好了
→ TCSSH: 這樣說來其實跟凍不凍負八十度C無關了