[求救] western會有黑暗星雲出現

[REIDO (NEET)]

http://tinyurl.com/ort2zx5
http://tinyurl.com/nrpayvk
這是我泡western常會看到的現象，某區域會完全沒訊號，背景和target都是。
我一抗是用夾鏈袋，blocking,二抗和ECL是加在塑膠盒中，有確定在shaker上
可以自由移動

從時間點上來分類有幾種可能

1.membrane在轉印前就有問題了，無法protein binding
2.blocking和1抗沒結合
3.2抗沒結合
4.ECL沒泡到

第一項，機率很低吧？
第二項，我覺得這種因素頂多沒有target，不會到連背景都消失
第三項....機率也不高，因為塑膠盒中的membrane可移動，應該都有泡到
第四項，我先把membrane丟到ECL盒子中，拿出來貼在盤子上，上面又繼續淋ECL蓋到滿
，機率應該也不高

總之目前我想不通，想請問有人知道這原因是什麼嗎？

--
                        小黃小黃別生氣，明天帶妳去看戲。


                        我坐椅子妳坐地，我吃雞腿妳啃骨。

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.137.85
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1442923412.A.D08.html
推 caesar0926: 1.請問用什麼blocking 2.WASH 次數 3.一二抗各泡在哪
推 mesenchymal: transfer完用Ponceau S染membrane確認第一項
→ mesenchymal: 搞不好就是氣泡或其它問題導致transfer不完全
推 ljii: 1.transfer 沒密合或是膜和膠之間有東西 2. 手指摸到膜
推 david31408: membrane存放多久了??? 你有用鑷子嗎?
→ blackphantom: 看起來像transfer時有氣泡，不像blocking失敗
推 LIAR: 不過transfer失敗的話，應該還是會有背景值吧?lane和lane之
→ LIAR: 間的亮度，那邊也太黑了吧？