[求救] Stripping 時間?

[grassshan (紙飛機啊歐歐踢欸死)]

最近在做Western 想試試同張膜重Hy抗體

我們家Stripping Buffer是自己泡的~

pH是6.7

膜是PVDF膜

昨天剛照完冷光,想要洗一下重新Hy Actin
但翻遍實驗室的protocol...只有找到怎麼泡阿 QAQ!!!!

上網查跟問同學 好像 要加熱? 還有看到廠商賣的只要stripping 五分鐘?

想請問版上大大~

通常自己泡的Stripping buffer,會怎麼使用呢?

加熱的意思是 整罐裡面丟stir 放加熱器上加熱 再淋在膜上嗎 囧?

我查Stripping時間大概都在30分鐘內,

那結束後是從blocking開始,還是直接就可以Hy一抗了呢?

有需要我後續再補上完整配方~!!

感謝各位大大 >_<

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.135.61.97
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※ 編輯: grassshan (140.135.61.97), 09/30/2015 13:25:50
推 blueness1225: 我們家是整罐裡面丟stir 放加熱器上攪拌均勻再淋在
→ blueness1225: 膜上。
→ blueness1225: Stripping放在60度水浴槽30分鐘,結束後是從blocking
→ blueness1225: 開始,再Hy一抗
推 tynse71864: 時間要依前一隻強度調整哦！
→ tynse71864: 我家是50度7分鐘  strip完在用tbst洗5分鐘3次 之後blo
→ tynse71864: ck
→ tynse71864: wash 3次很重要！！不然第二隻抗體會爆炸
推 pandagod: 記得之前看過一篇文章是說stripping不如重跑一張XD
→ pandagod: 如果只是test antibody倒是還好，定量就...
推 Fongshin: 有用過跟廠商買的，用室溫三分鐘即可，還被我們拿來reus
→ Fongshin: e，效果還不錯