[求救] clone

[GanLinBa (Fait votre père)]

我想把我的gene接到pflag-cmv-2


Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TCA TCG ATA...........
                          -------------------------------------------

                                     MCS


如果用EcoR1(G^AATTC) 去切把我基因接近去


Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TC-gene

請問這樣可以嗎  gene自己有start coden 所以會轉入

如果今天flag是在尾端 gene的前端可以隨意選 而尾端必須不能shift否則無法表現flag

可是今天flag在前端 但TC後面如果接上start coden的第一個A

會shift start coden (inframe/frame的問題)

1.假設我這樣接 flag會表現 那gene呢? 是不是就不會表現?

2.還是他自己有start coden 所以promoter開始做 protein 還是會translation

感謝

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→ blence: 你已經知道1跟2的答案了,既然Flag跟gene的表現不會在同一
→ blence: 個polypeptide上,這樣做不就是接心酸的
→ GanLinBa: 感謝1f 所以flag 和 我的protein 都會有
→ GanLinBa: 但用flag antibody 可能就壓不到我protein位子
→ GanLinBa: 也就是IP即使抓得到flag但沒我的protein在上面？
→ blence: 你在繞口令,把整個seq進去translation,就知道產物是什麼了
→ Ice9: 你幹嘛糾結在這種問題上？會 frame-shift 就應該要重接啊。
→ Ice9: 1.那東西就不會是你想像的原來那個，雖然 flag-??? 會存在。
→ Ice9: 但能不能撐到被你發現又是另一個問題了，但絕不是你要擔心的
→ Ice9: 2.in vitro狀況下有可能會選擇其他ATG而被偵測到，但細胞內
→ Ice9: 的表現，你想看到選擇其他 start codon 的產物，並不容易。