[求救] CHX與Protein stability assay

[shinchenboy (欣承男孩)]

各位版友大大們好

小弟我最近實驗要去測試某Non-coding RNA對某Protein stability的影響

實驗設計主要是藉由加入了CHX這個藥物之後抑制translation的進行

之後收各個時間點的protein然後跑western

藉此來看target protein的降解現象

然而我現在遇到的問題是

我CHX藥物劑量從1提高到10ug/ml

時間點收到24h

我要看的target protein似乎沒有甚麼影響

我的細胞(MCF7)感覺也好好的沒有甚麼大量凋亡的現象(理論上來說細胞的轉譯活動
抑制了應該漸漸會有細胞活不下去吧...)

跟老闆討論 老闆覺得CHX可以在增加 不然就是把收的時間點拉長

可是我查paper

好像幾乎沒看到有CHX加超過10ug/ml的

有沒有人收超過24h

還是說是CHX沒有work?(可是CHX是新買的)

我的CHX是溶在酒精裡 4度C保存

我要看的Protein是NDRG1 Paper上做過類似的實驗的時間點是到8h就有效果

CHX也只加5ug/ml

所以我的問題到底出在哪咧?

有請各位大大們小弟解惑了




--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.121.119
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1448524833.A.DC4.html
→ blence: 你一定要收24h嗎？
→ blence: CHX應該不少用20~100ug/ml, 時間在2～8h之間
→ lail: 有可能你的target半生期很長啊
→ Ice9: 1.如blence建議，加大，縮短看看；2.Ab可辨其他NDRG2,3,xxx?
→ untilnow: 這不是常PO_文又自刪的帳號嗎
→ untilnow: 回錯篇 SORRY
推 michealking: MCF7有這麼敏感嗎，直接測下游gene表現吧?