[求救] Mammalian two hybrid system

[seethegame (影子)]

最近在做Mammalian two hybrid assay

使用的vector分別為: pM-X pvp16-y以及pg5seap

細胞株:NIH3T3

transfection reagent:lipofectamine 3000

方法是:

1.將NIH3T3放在1ml opti-mem in 6 well

2.將pM-x:pvp16-y:pg5seap =3:3:1的比例已lipofectamine 3000送進細胞

DNA總量為:5ug

3.第2天換成1ml growth medium(含FBS)

4.將medium取出並加熱65度 30分鐘 然後以冷光偵測

因為是預測試 所以組別只有1.pM-X pvp16-y pg5seap 和2.pg5seap only

原本想說就算兩個蛋白沒有交互作用seap含量也應該是1=2

可是測出的結果卻是2>>1

所以想請教各位前輩這大概是怎樣的情形 謝謝




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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 122.117.10.237
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1448731099.A.3F0.html
→ blence: 猜2.的plasmid沒有在實驗操作上成為1.的合理對照
理論上pg5seap在沒有pM和pvp16的情況下是沒辦法表現seap

可是出現這樣的結果會讓人很困惑
※ 編輯: seethegame (122.117.10.237), 11/29/2015 01:32:27
→ blence: 只有表現很低到背景值，不可能完全沒有表現
→ blence: 別的不說,只送pg5seap送0.1ug或1ug,結果也會有差
→ blence: 第一句推文在說,兩組seap在transfect過程沒控制到一樣的量