[求救] 請問用Flow測鈣離子切細胞的方法？

[USARMY (戰鬥小雞)]

各位大大好

小弟我在做有關藥物影響細胞內鈣離子濃度的研究

除了用螢光顯微鏡外還需要使用到Flow Cytometer

細胞是是初級培養的心肌細胞

給予藥物48小時後分別染Flou-3 AM以及Rohd-2 AM

所有的溶液都同時用含有鈣離子和藥物去做染色和Wash的動作

但是上機的時候測出來的數值都有時上升有時沒有

我和老師都懷疑是因為trypsin的關係

因為我們用的是0.25%Trypsin+含有EDTA的HBSS中

有試著將2mM的CaCl加入trypsin但是效果好像也沒比較好

請問有人有經驗可以幫忙嗎？

或是推薦可以切細胞而且含鈣離子的酵素

感謝

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推 patricksky: EDTA會抓鈣離子 應該說是抓2價離子
→ patricksky: 不過還是要看濃度大小是否會影響到你的實驗
→ USARMY: 我知道EDTA會抓，想說是否考慮直接自己配有鈣的Trypsin
→ tynse71864: (單純想問)為什麼要加 trypsin？
→ USARMY: 因為染完要把細胞切下來離心呀！
推 lail: 細胞內鈣離子會受到trypsin影響嗎？？（純發問）
→ USARMY: 因為我買的trypsin是溶在無鈣的HBSS中外加了EGTA，基本上
→ USARMY: 是Ca2+ free的環境
→ lail: 我的意思是，你是測細胞內鈣離子，而trypsin/EDTA是作用於
→ lail: 細胞「外」，為什麼會覺得trypsin/EDTA會影響細胞「內」鈣
→ lail: 離子？另外，應該有無EDTA的trypsin可以買，真擔心就換掉吧
→ Ice9: EGTA抓鈣不是更強嗎？
→ USARMY: 我的心肌細胞處在無鈣環境的時候，在螢光動態偵測是看不到
→ USARMY: 內鈣的波動的，所以我推測用了trypsin後會影響到我的結果
→ USARMY: 之後會考慮試試不含EDTA的trypsin!