[討論] competent cell (勝任細胞)

[michaelhsien (MichaelHsien)]

最近實驗室在做中研院的CRISPR實驗
中研院建議使用 Invtirogen 的 E.coli Stbl3 strain
來放大他們所提供的 lentiviral vector (plasmid)
因為這類的plasmid在DH5alpha中
會有產量低、甚至發生重組(變異)的問題

但是這一株competent cell，一個反應要價$700元左右
波仕特代理的Endura G10 strain，也要$400元左右
(相較於DH5alpha，一管大概$50元...感覺差很多)

最近實驗室可能會大量使用CRISPR
為了節省老闆的錢...
想起以前大學的時候，會自己做勝任細胞
雖然轉型效率不比市售的好

但是想想
頂多把plasmid加多點，或塗多點菌也是可以吧??
↑是這樣嗎? XD

我要transform的東西
不是ligation products
而是一般construct好的plasmids
所以轉型效率對我而言可能不是很重要
(這些勝任細胞的genotype/phenogype才是我要的吧...)


還是之後的問題沒有我想像中的單純? XD

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.227.168.176
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1450608235.A.D78.html
推 tynse71864: 建議詢問對方吧 不用 dh5a 應該有特殊理由
推 shelix: lenti-vector用DH5alpha會發現很多重組的clones,光挑到
→ shelix: 正確的就飽了
推 silverberry: 建議一定要用 stbl3 系的菌種來做。不過自己做
→ silverberry: competent cell 是沒問題的。ligation product
→ silverberry: 多轉一點就是了。
→ storm780121: 有做過這隻的勝任細胞 用起來ok der
→ a90648: 我個人是用dh5a完全長不出來
→ untilnow: 為什麼要省老闆的錢 浪費自已的時間？
推 qiet: Sigma好像有一隻沒那麼貴的可以用.
→ qiet: DH5alpha以前用過, 要人品夠好就做得出來XDD
→ blence: 可以拿到菌之後,找台廠代製生產
→ blence: 台灣有幾個廠牌在做quick transform,其中有會幫人代工
推 leoblack: 用建議的菌會快很多~用DH5alpha也可以做~只是要挑clone
→ leoblack: 且一路都要送sequence再三確認序列有無突變
推 michealking: 1.不用幫老闆省錢，做出對的才是重點
→ michealking: 2.DH5alpha要用也可以啦 可是你要多浪費時間跑膠 PCR
→ michealking: 時間上一點也不划算啊~~~
推 alaric: 別浪費時間了, 把錢花下去就是了.
推 linporu: 花錢買時間實際很多
推 mandible: 用lentivirus vector backbone 最好建議一定要用stbl2/3
→ mandible:  的原因不光光是efficiency 的問題，也要造成transforma
→ mandible: tion mutations！建議還是不要亂換competent cell
推 Realthugz: 可以自己放大 到不要白痴到換strain
推 Realthugz: lenti或是rosa26都要用這株
→ Realthugz: 有同事沒注意用dh5a卡了很久才問我
推 hitmd: NEB也有不錯的 可以參考看看