[求救] SYBR做QPCR

[WMB (踏出改變的第一步)]

實驗是要從plasma裡萃取cfDNA，再用Q-PCR定量

目前的實驗流程是前任助理開發的
用Roche High Pure Viral Nucleic Acid Kit萃取DNA
機台是ABI StepOnePlus，使用ABI的Mastermix

現在的狀況是
用伯昂代理的ThermoHotStarr Master Mix可以做出PCR產物，
但是用ABI的Master Mix做Q-PCR則沒有PCR產物

所以我想問的是
1.有哪間廠商還有在賣SYBR Green?
我想要外加到ThermoHotStarr Master Mix來做Q-PCR
已經問過萊富、進階、伯昂、波仕特都沒有，
好像這兩年全世界都只想賣SYBR master mix不賣SYBR染劑了
2.自己外加SYBR Green I做Q-PCR除了要再加ROX dye之外有哪些注意事項?
比如使用的濃度或是稀釋用的buffer?
3.還有哪家廠商的SYBR Green Master mix好用?
試用過波仕特最近新代理的，會有雜band。
進階的則不給試用包。
4.我有點懷疑Roche這個kit可能不夠力，
各位做cfDNA都是用哪家的kit在抽DNA?

感恩

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 110.30.163.201
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1453778077.A.B0E.html
→ blence: SYBR green(我知道的)最早是molecular probe賣的,後來被
→ blence: invitrogen買下,又跟ABI併與被Thermo-fisher併,所以萊富一
→ blence: 定有賣
→ blence: SYBR Green I (S-7567)
謝謝，
invitrogen被Thermo-fisher併購，但仍是進階代理
ABI被Life併購又被Thermo-fisher併購，目前仍是萊富代理
進階和萊富的業務都幫我查過原廠已經不賣SYBR Green I了
只有SYBR Master Mix
明明他們的Taq就不夠強，幹嘛放棄有SYBR需要的客戶啊...
※ 編輯: WMB (110.30.163.201), 01/26/2016 17:57:12
→ blence: 不是的,是Invitrogen與ABI合併組成Life Technologies
→ blence: 原廠網頁還有價格還可訂購,你要不要直接問台灣分公司?
→ blence: SYBR Green I不是只有qPCR,一般染色也會用到
→ johanjohan: 採血管也許有影響
※ 編輯: WMB (124.8.73.194), 01/26/2016 23:02:50
→ xxtomnyxx: 今天剛好看到一篇用 cfDNA 分析的 paper，那篇 paper
→ xxtomnyxx: 是用 QiaAMP Circulating Nucleic Acids kit (QIAGEN)
→ xxtomnyxx: 純化血漿中的 cfDNA
推 bahrimank: 我們家實驗室SYBR是用Roche原廠的，沒有雜band的情況
→ Fongshin: 目前整套從RNA到cDNA是用QIAEN的試劑，SYBR 也是跟他們
→ Fongshin: 買的，因為使用量很大，研毅和創世紀是最近有在接觸的廠
→ Fongshin: 商
推 allisa: 可以參考QIAGEN的試劑
→ akta: 個人認為最好用的是Lonza SYBR green II