[求救] OCT 包埋後液態氮急速冷凍後 切片問題

[Cheinder (w23w)]

想請教一下 液態氮急速冷凍對於OCT 有無影響?
會這樣問主要是因為急速冷凍後置入-80 冰箱
切片時將機器溫度調整 10, 15, 20 度 (不同時間點做的)
無論在哪一個溫度處理下 都發現拉片時　ＯＣＴ　部分看起來
都有點皺皺的拉到底時切片容易凹凸不平　也就是很難貼齊平台
後續黏片時非常容易有皺摺或氣泡～（貼肌肉組織不會；乾冰急速冷凍）　

我的方法與步驟如下

小鼠灌流4% PFA 後取大腦組織
PFA 固定 overnight
30% Sucrose 脫水兩天
拭鏡紙吸乾外圍水分置入包埋盒 (內含OCT)
浸潤 30分鐘後進行液態氮冷凍



不知是否有人有相關經驗或是可以給建議~感激不盡！
ㄑb

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.12.183.42
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1457528644.A.812.html
→ genep: 我不是專門做動物實驗，但之前做過幾次。腦組織用sucrose
→ genep: 脫水後，就直接用oct包裹腦組織固定在標本台上，固定後就
→ genep: 切片，沒有另外急速冷凍標本。我不知道是不是這個原因，還
→ genep: 有想問有換新的刀片試試看嗎？
推 elelith: 為什麼一定要用液態氮不能用乾冰?
→ lesswind: 通常我們脫完水放到OCT就直接泡到液態氮理了..不用浸30
→ lesswind: 分
→ Fongshin: 我以前做冷切鼠腦的（大小鼠都有），你有照片嗎？看看
→ Fongshin: 能不能幫上你的忙
→ Fongshin: 可以回站內信給我
→ sunorange: 我自己冷切鼠腦不敢用液態氮 ！必裂 。我都緩慢冷凍
→ Cheinder:  我在試試不急速冷凍看看 ~ 有換過新刀片了 謝謝!
→ Cheinder: 也有試過用乾冰冷凍的 但是拉片時差不多容易皺~ 謝謝!
→ Cheinder: 如果是先用 OCT 包埋後用液態氮急速冷凍組織比較不會裂
→ Cheinder: 謝謝!
→ Cheinder: 我再把東西整理一下再寄信請教F大~~ 謝謝你!
推 jo3126: 要切前一天，把腦包埋oct 放-20 O/N ，隔天用-20～-25切，
→ jo3126: 你參考看看
→ Cheinder: 請教一下 這樣子不會容易產生冰晶致使腦結構破損嘛?
→ Cheinder: 因為之前包埋漏放-80隔夜用-20度切 組織很多破洞 不知是
→ Cheinder: 會有類似情況? (大腦切成0.5公分 30% sucrose 兩天脫水)
→ jo3126: 還好欸 都沒有破損的情況
推 greendeer: 你凍OCT 的時間要慢慢的凍，不能快速，這
→ greendeer: 樣樣本比較不會有皺摺