[求救] 含甘油保存劑之生物樣品的蛋白質萃取方法？

[Astrophyllit (Astrophyllit)]

哥哥沒有帳號所以代p.o
可能會回覆比較慢

如題
我的樣品應含有甘油保存劑
想要萃取其蛋白質
而後進行蛋白質二維膠體電泳、尋找未知的功能性蛋白質
因樣品含甘油，不太好前處理
跪求適合的方法或protocol

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.47.9.234
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→ tynse71864: 標題怪怪的 ?
→ Astrophyllit: 跪求～含甘油保存劑之生物樣品的蛋白質萃取方法？
→ Astrophyllit: 感謝告知 其實我也第一次發文 沒注意到標題字數
※ 編輯: Astrophyllit (114.47.9.234), 03/10/2016 01:07:35
推 wanderchang: 透析
→ Ianthegood: 所以sample是什麼? suspension culture? trizol?
→ Ianthegood: phenol? cell pellet?
推 Sherry5566: 透析+1，看是用透析管還是透析膜，端看你蛋白的耐受
→ Sherry5566: 度
wanderchang: 透析
我回答：我的樣品未知其蛋白質資訊，只知道是廠商堅稱含有酵素成分的污泥沉降劑(用於處理廢水)，透析膜孔徑大小的選擇可能是一件難事！？

→ Ianthegood: 所以sample是什麼? suspension culture? trizol?
哈哈！我的樣品不是動物組織、植物、細胞、沒有 suspension culture 和 pellet 可言耶！但是超高速離心後倒是可以把那褐色的沉降物當成pellet，去掉上清液。
另請問trizol是萃取RNA的試劑？？

→ Ianthegood: phenol? cell pellet?
我回答：有人好像有建議過含油類的樣品可以用Phenol法萃取，但一開始不知道如何前處理，超高速離心，假裝它有pellet？嗚嗚
※ 編輯: Astrophyllit (49.215.19.158), 03/11/2016 16:35:27
推 leoblack: 跑個FPLC,用Desalting column置換成沒有甘油的buf
推 star55555: 怎樣萃取蛋白？
推 wanderchang: 3k大約30個胺基酸，你的東西聽起來是個酵素，不至於
→ wanderchang: 比這還小？
→ wanderchang: 透析完再做活性測試
→ Ice9: 蛋白過透析，還要考慮緩衝液和pH值。就怕凝集或降解。
→ Sherry5566: 你的酵素很耐嗎？ 用desalting column是快速的透析
→ Sherry5566:  有可能變性喔！