[求救] ELISA做不出來～煩請各位大大指點

[l19911012 (全省吃透透)]

發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題

若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，
請務必註明貴實驗室願意設立 正式合作或 簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除

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我的實驗是從空盤開始coating
從過年前試到現在都做不出來
有思考過是不是因為沒有binding上去的問題
從原本的夾心法換成直接先種抗原
還是做不出來
我的抗原是IgG
Buffer也是carbonate 和PBS都試過
不知道是不是我在wash時有問題
我通常垂直向下倒
然後well裏沒有液體
不知道這樣有沒有問題
請各位大大救救我～
手機排版請原諒～

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※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1458115747.A.247.html
→ lesswind: 還是你coating的時候就出問題了呢?
→ YAHO0: 做不出來有很多種做不出來 把情況描述清楚
→ jsi: commercial kit還是自己開發的套組? 用錯盤子? coating buf.
→ jsi: 用甚麼buffer?
→ Fongshin: 寫的有點簡略，可以在寫清楚一點嗎
推 leoblack: 是repeat不出來？還是Ab根本不認native蛋白？
→ l19911012: coating buffer 就是試過PBS和carbonate
→ l19911012:   盤子是用PS材質的去coating 因為我是要
→ l19911012: 用我自己的系統去做顯色來測抗原 所以跟
→ l19911012: 一般二抗後面的步驟不太一樣 有試過藥品
→ l19911012: 應該沒有問題 我的抗體跟抗原也是同源 所
→ l19911012: 以不知道問題出在哪
推 psamei8098: 可能是藥品壞掉
推 ararthur: 很有可能是藥品壞掉+1 特別是protein 我之前就是用了放
→ ararthur: 超過三個月的recombinant protein 整個結合力出了大問題
→ ararthur: 不過你還是應該詳述一下所謂的"做不出來" 是哪裡做不出
→ ararthur: 來、結果呈現什麼情形？
→ ararthur: 如果是curve完全無法拉得出來 建議要先做詳細的titrate
→ ararthur: 才能確定每一個chemical是在適當的濃度下 否則飽和或未
→ ararthur: 到敏感度限制的時候 是完全無法看出curve變化的