[方法] 比較各種cell line beta-actin表現量

[spirithorse (咩)]

我的實驗是用western blot比較各種cancer type某基因表現量，並以beta-actin作為int
ernal control.
目前做兩次（分別測濃度），壓片結果每種cell line間的beta-actin都有高有低，不是
像單一cell line處理的那麼一致。
請問loading 相同濃度的total lysate，不同細胞應該beta-actin量也可能不同嗎？
因為老師挑我actin沒配好，但心中覺得哪裡怪怪的......

謝謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.73.118.113
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※ 編輯: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:07:18
→ blence: 你們老師肯定沒做過,不一定是你定量問題
→ blence: 我以15株(其中10株breast)經RIPA以BCA定量後跑膠的結果,
→ blence: tubuline變化最大,ACTB在breast還好,但不同tissue也會不同
→ blence: GADPH在不同tissue則是比ACTB好,你最好能試過選其一
→ blence: paper做法,有些只寫濃度不放control,有些是寫以conrol定量
謝謝（拭淚）當下我想到的是細胞大小有差異，所以actin應該也會不同
※ 編輯: spirithorse (42.73.118.113), 03/31/2016 20:53:23
→ michealking: 推樓上 不過通常多組細胞要量化用數字比
→ michealking: western圖分開放 然後control要慎選
→ Sylvaine: 推樓樓上，然後記得要把圖量化來做比較
推 chihsiao: Total protein as loading control may solve your prob
→ chihsiao: lem
推 tynse71864: 順問一下 染完抗體後 以 comassive blue染 pvdf作為 t
→ tynse71864: otal protein ctrl可行嗎?
→ blence: 除了植物等其他模式物種,人類癌細胞沒看過有paper