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作者lackgirl (愛幻想)
看板Biotech
標題[求救] 細胞實驗，關於時間點的問題
時間Wed Apr 27 12:55:52 2016
實驗目的:想觀察SW480經過不同時間的serum stavation(12hr，24hr) 會不會因為時間的長短不同，產生apoptosis現象 參考此文章:因為Western blot ，未經藥物誘導的細胞也有看到cleavage caspase8 而此藥物主要觀察的現象是誘導necrosis，所以想確認是否為實驗過程所誘導的 https://www.researchgate.net/post/How_can_I_do_serum_starvation_for_suspended_ cells 實驗流程:1.細胞分盤等待貼盤時間固定12hr 2.serum stavation 固定12hr & 24hr兩個時間點 3.模擬treated drug 時間 16hr 4.flow cytometry 核心問題:如果我使用不同批cell line，想要觀察時間點的差異，能可以解釋此現象 會因為時間不同而型態有所不同嗎? 例如:甲:A盤直接分B兩個條件的細胞(12hr,24hr)出來， (困擾的地方，會做很晚) 乙:使用不同盤的細胞，A盤分B(12hr)，C盤分D(24hr)，但實驗條件相同 另外還有個小小的問題: 如果不同種Cell line間想要比較的話，當中serum stavation 時間不同的話 要怎使實驗一致。 **不同的意思是，因為有使用初代細胞，有文獻指出這種細胞serum stavation 過長會漂浮，所以想問看看要怎麼解決，還是在文章裡面標示清楚就好? 文章有點長 感謝大家 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.74.159 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1461732955.A.5D3.html
→ blence: 一般seeding都是等24h再進行後續實驗;模擬drug 16hr是為了 04/27 13:04
→ blence: 產生apoptosis？ 一般為了方便都6,8,或24h,是特殊drug嗎？ 04/27 13:05
→ blence: 我的習慣會先試甲,但修改成作息方便的操作條件 04/27 13:07
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:58:54 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:29 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:57
→ lackgirl: Seeding後24h是為了讓細胞型態回到正常的狀態嗎? 04/27 14:01
→ lackgirl: 這樣的話細胞數量要怎麼估計 04/27 14:02
→ lackgirl: 之前有用過這株細胞做過WST-1 assay OD值與細胞數的關係 04/27 14:04
→ lackgirl: 條件是用這樣，因為實驗室這株細胞已使用約幾年時間 04/27 14:05
→ lackgirl: 所以有點不確定doubling time會與來源很相近 04/27 14:06
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 15:46:23
推 aaaazzzz: 像我習慣是下午種細胞，隔日上午進行後續處理(如 04/27 16:55
→ aaaazzzz: starvation,加藥等) 04/27 16:55
→ aaaazzzz: 我記得先前starvation時間過長,會發生細胞死亡(顯微鏡) 04/27 16:56
→ aaaazzzz: 但沒有特別去壓caspase 3(要跑12%的膠，有點麻煩) 04/27 16:57
推 qiet: 不太懂做這實驗的目的, 平常用藥物處理的時候不也會有組 04/27 17:31
→ qiet: 對照組嗎, 應該就是serum starvation時間和實驗組相同的 04/27 17:31
→ qiet: DMSO or 其他vehicle control 04/27 17:31
→ lackgirl: 因為control 組也有看到caspase 表現量 04/27 18:25
※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:35:20 ※ 編輯: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:38:00
→ blence: 我也不太懂,不能甲分盤後取normal,12h,24h starved這三盤 04/27 21:27
→ blence: 直接看caspase 8 WB? 04/27 21:28
→ lackgirl: WB 比較費工XD 那我直接還是照原本計畫走好了T^T 04/27 21:51
→ lackgirl: 因為有4個cell line要做 WB會做到暈 04/27 21:52
→ Ice9: 我們是要求這類實驗，細胞要至少過了一次 doubling time 才 04/28 06:54
→ Ice9: 開始。若是初代細胞問題，那就限制所有實驗細胞都是初代的。 04/28 06:55
→ lackgirl: 使用初代的目的是想確認normal cell與cancer cell 04/28 12:23
→ lackgirl: 藥物作用後的差異 04/28 12:23