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大家好,又來請問 WB 的問題, 我同時做 primary antibody incubation 了三張 membrane, antibody 都是 re-used 的前幾次做都沒問題, protein ladder 加的量也都沒變, 但是昨天做的兩張,protein ladder 反白(如圖)。 http://imgur.com/jhDjesJ 請問有沒有人知道這是什麼原因嗎?感謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 96.49.200.66 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1463286280.A.03D.html
tynse71864: 記得是訊號太強爆掉 05/15 13:00
ad1980: 爆掉不是右邊全黑的那點嗎?我的如果爆掉在 membrane 上可 05/15 14:08
ad1980: 以看到焦掉,但顯影會全黑不會反白,protein ladder 從 m 05/15 14:08
ad1980: embrane 肉眼看沒焦,不會比右邊那塊黑點訊號強。 05/15 14:08
tynse71864: 你搜尋板上 “反白” ,可能可以找到一些原因 05/15 14:45
Ianthegood: 我以前反白也是爆掉 但是你的condition都跟之前一樣吧 05/16 07:58
blence: unstain ladder? ECL從頭用到尾? Rab? membrane reprobe? 05/16 19:35
blence: marker不像是燒掉 (反而倒數第二marker位置的band燒掉了?) 05/16 19:36
ad1980: 我的 condition 跟之前一樣,有一張一起做的沒這種情形。 05/17 01:09
ad1980: 爆掉是倒數第二大黑點的那個沒錯,marker 應該不是爆掉, 05/17 01:09
ad1980: 但不知道為什麼會反白。 05/17 01:09
ad1980: Marker 是 prestained,ECL 每張 membrane 都有還新的, 05/17 01:10
ad1980: 不是 reprobe。 05/17 01:10
michealking: ECL下的不夠均勻 累積在那也會這樣 05/17 16:19
ad1980: Stripping 完後 reprobe,ladder 的反白消失了,只是我一 05/19 02:36
ad1980: 直都用同樣的步驟,同樣的方式去泡 ECL,不知道為什麼就這 05/19 02:36
ad1980: 兩張出現這個問題。@@ 05/19 02:36