[求救] 用flow測細胞存活率

[satan317 (傻達歐)]

最近才開始接觸flow
想起問一些問題

1. http://i.imgur.com/w1mYUpV.jpg
這是只有細胞，不經任何處理
像這樣圈gate 只有圈到5% 算正常的嗎?
或是我範圍應該要圈大一點?
總覺得顯微鏡下觀察的細胞數很多
結果跑flow 50000顆中只有2500顆是細胞這比例怪怪的

2.http://i.imgur.com/VTHTy7u.jpg
這是上圖gate中的細胞，FITC跟PI的結果
完全無處理，細胞存活率這麼低是正常的嗎?
因為是還有要測其他膜蛋白
怕trypsin處理會有影響
所以細胞是用刮棒刮下來的
刮的過程有在冰上
如果不正常，想請問有甚麼可以改善的方法嗎?


細胞是用LL2

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.109.112.154
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※ 編輯: satan317 (140.109.112.154), 05/17/2016 18:06:37
推 conective: 試試看accutase打 看起來存活率只有50% 有點太低了
→ conective: 你上普通PBS或是沒有細胞的medium也會有左下角那群嗎?
推 maybereft: 可用Versene solution dissociation cells
→ maybereft:                    dissociate
→ satan317: 沒試過純pbs跟medium
→ satan317: 不過我在想應該跟我medium和PBS也收集起來一起離有關
推 dkal6: 只有50%是細胞很有可能是因為 A. debris  B. false signal
→ dkal6:  triger by noise。假設你permilize的步驟問題不大，那應
→ dkal6: 該就是在B的問題。因為你threshold數值設為1，因此一個細胞
→ dkal6: 有可能會顯示兩個訊號，而比較強的訊號就是你的main popula
→ dkal6: tion, 而比較弱的訊號就是出現在像是拖尾的地方。
推 dkal6: 建議可以拉高threshold的值到50試試看，main population應
→ dkal6: 該會變的更圓一些。
→ lail: 你fsc-ssc圖的scale bar是不是要用linear的？用log的會不會
→ lail: 把細胞壓縮了？
→ satan317: threshold是指電壓嗎?
→ satan317: 剛有試著用linear 差別不大