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最近genotyping某個gene一直p不出來,但一樣的reagent去p另一個gene有出來。 已經trouble shooting過,包括換新的pcr grade water, reagent, primer等,依然有一樣的情形發生,所以想請教板友,謝謝。 目前的結果 http://i.imgur.com/LccVwxM.jpg 以前正常的結果 http://i.imgur.com/BVfkrrR.jpg 以前和現在的pcr條件都一樣,沒有改變 ----- Sent from JPTT on my OPPO F1f. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.140.23.151 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1464171216.A.703.html
sunorange: 把你的DNA稀釋就會出來了 05/25 22:09
e104582001: DNA下太多了 05/25 22:40
elsavicky: 有稀釋過DNA,也有放positive control(以前P得出來) 05/25 23:12
elsavicky: 在smear的部位隱約有清楚的major band... 05/25 23:14
elsavicky: 忘了說...連negative control都是一樣smear狀 05/25 23:39
patricksky: primer汙染? 05/26 10:09
patricksky: primer換新的是只重訂一隻 還是只是重新稀釋? 05/26 10:09
elsavicky: 全部重新訂過,用新買的pcs-grade water稀釋(在hood) 05/26 12:12
elsavicky: pcr grade water 05/26 12:13
patricksky: 如果全部材料都換過 就有可能是環境或是人為操作問題 05/26 13:29
patricksky: 比較常見就是pipetmen的頭汙染 05/26 13:30
patricksky: 能拆就拆 然後頭部分泡泡酒精 接著丟去滅菌 05/26 13:32
patricksky: 如果不能拆或怕的話 做簡單滅菌也可以 05/26 13:32
patricksky: 另外要注意的是之後pipet清理後記得做校正 05/26 13:33
elsavicky: 謝謝你,我們也懷疑是pipette污染,今天去hood操作,已 05/26 14:38
elsavicky: 經p出來了! 05/26 14:38