→ sunorange: 17萬偏貴 ,如果自己做 ,大約也要三個月 05/29 23:31
→ e8795623: 順利三個月~17萬不保證成功也太..... 05/29 23:35
→ blence: 訊息不足,是從cloning到挑出mix clone,還是病毒感染或到 05/29 23:47
→ blence: single clone,而且細胞來源等等,答案差異很大阿 05/29 23:49
pCMV上的載體已經有我要的target protein,
要transfect到口腔癌細胞上,
先前發現使用的口腔癌細胞使用polyjet transfect EGFP約3成,
→ Ice9: 為什麼不先做突變再轉到病毒載體上?
謝謝喔,但我不曉得先mutation再轉到病毒載體,
和轉到病毒載體再做突變的差異?
05/30 01:30
推 joseph103331: 細胞種類 挑選方式 是否有類似GFP的marker都會影響 05/30 19:03
→ joseph103331: 速度啦....把材料都攤開來才比較好抓時間 05/30 19:04
GFP marker的意思是甚麼呢?
我先前曾經把我要的protein接上EGFP-N1,
tranfection之後,再使用G418來篩選,
結果養了二代細胞就不亮了,
不曉得是否帶有EGFP的fusion protein就比較難養?
※ 編輯: niwe (210.60.122.151), 05/30/2016 22:23:34
→ blence: 看到你的幾個回覆覺得有著比stable clone更復雜的問題 05/30 22:55
→ blence: 不介意多少錢的話,全部外包是最好的辦法了 05/30 22:58
→ niwe: 聽到b大這樣說,聽起來非常不樂觀,第一次操作就學個經驗吧 05/31 23:00
推 silverberry: 不知道你想要的是 stable pool 或是 stable single 06/07 11:39
→ silverberry: clone, 這兩個時間會差非常多。 06/07 11:39
→ silverberry: 要做病毒的話,實驗室生物安全櫃是不是能配合上。 06/07 11:41
→ silverberry: 想用 adeno/retro/lenti 哪個系統呢? 06/07 11:42
→ b1l3hlkff: 如果細胞都好的話兩週到三週,HEK293ft產生病毒三天, 08/14 17:18
→ b1l3hlkff: 同時感染細胞,看你細胞能長多快,三代後就能拿到。我 08/14 17:18
→ b1l3hlkff: 自己是做乳癌的Hs578t大概兩週就拿到了,但長得慢的可 08/14 17:18
→ b1l3hlkff: 能要一個月。不過建議你把篩選的抗生素換成puromycin, 08/14 17:18
→ b1l3hlkff: G418很難篩。 08/14 17:18