[討論] SDS-PAGE sample煮過後跑不下來

[gustpigex (鼻子好像灌太多了)]

http://i.imgur.com/9BgVoQW.jpg
如圖所示，
PC是小鼠組織萃取的positive control，
1是沒transfect plasmid的細胞，2、3是有transfect plasmid的細胞，在煮過之後只有細胞組的目標蛋白會卡在上面跑不下來。

雖然不煮之後就成功跑下來了，但還是對這個狀況很好奇，請問大家有遇過類似狀況嗎？

煮的條件是104度乾浴槽煮10分鐘，用的是DTT。

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推 ad1980: Transmemberane protein? 有的好像要 65C 才跑的比較好
→ gustpigex: 是transmembrane protein沒錯，但為什麼只有細胞的會卡
→ gustpigex: 住………
→ xxtomnyxx: 煮的溫度太高完全 denature 後降溫造成蛋白質疏水部 (
→ xxtomnyxx: transmembrane)的 aggrigation，因此過量表現時更容易
→ xxtomnyxx: 發生這個現象。 現在很多 protocol 都寫 Do not boil!
→ xxtomnyxx: 建議的溫度是 70 度 15 分鐘。
→ keeny: 感覺會不會是genomic DNA黏住, sonicate sample看看