[求救] 小鼠肺部冷凍包埋及切片

[kamisu (red)]

各位研究先進大家好，小妹最近開始做小鼠肺部的冷凍包埋切片，遇到了一些問題，希望
各位不

吝給我指教和意見：）

我的步驟為：將肺部剪下後浸入OCT中（沒有灌流），靜置約2小時，再放入-80冰箱保存
，直到

要切片時將他們放入液態氮中拿到切片機所在的地方，預計切的厚度為5 um，但每次切到
組織就

會破，無法切出完整的切片，就算調到10 um也是一樣。

我有幾個疑問：

1. 是不是需要先灌OCT到肺部？需要稀釋嗎？要灌多久？

2. 冷凍包埋之後如果不以液態氮攜帶就會溶掉，溶掉的話對組織會有影響嗎？

3. 破片的原因是因為OCT沒有進到肺泡裡嗎？

4. 肺部冷凍切片有可能切到3 um嗎？


跪求大家回答我很蠢的問題～～真的切不出來都要瘋了～～～

爬文了一下看到很多切腦組織的，但是組織不同應該也不能follow...

謝謝大家！



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推 YuChHa: 切片溫度太低吧! 調高一點.
推 tz2733: 1.有聽過先全身灌流PFA固定或取組織出來後以溶液(糖溶液
→ tz2733: 之類)浸泡處理置換水份 沒聽過灌OCT.....建議找paper看 2.
→ tz2733: 蛋白質在不同溫度來回會有變化吧....一定要避免呀~
推 eric2853: 我會先用30%蔗糖置換1天在泡OCT
→ tchan: 如上面各位建議，先泡30％sucrose脫水一天就會變得很好切!
推 osla30: 要泡到它沉下去
→ kamisu: 請問Yuchta大 切片機的溫度應該幾度比較適當呢？我是調-25
→ kamisu: 謝謝樓上幾位的回覆！我會試試看用30%蔗糖脫水後再泡OCT!
→ YuChHa: 你可以在可以試的狀況下試 -25~ -15 (都切幾片試試看)
→ YuChHa: 每個組織的適合溫度都不太一樣 差幾度切起來真的有差!
→ eric2853: -25對於肺臟來說好像太低了一點 我都調22左右～
→ kamisu: 感謝經驗分享！我會調整溫度試試看！：）
推 homeshawn: 不脫水直接凍切@@?
→ kamisu: 嗯……對…完全新手 T^T
推 greendeer: 你要凍OCT要快啦，不能放在-80，冰晶一定是慢慢形成
→ greendeer: ，你的組織當然破碎呀
→ greendeer: 3 micron可能要用塑膠切片了