[求救] 細胞長起來幾天又莫名死掉

[chirpspeep (吱吱)]

為了製作單株抗體，而在學校的某一棟系館篩選出一批融合瘤細胞株

凍存在-80約一個月之後，利用乾冰帶回自己的系館。

在放進液態氮前，想說解凍確認一下存活率

但解凍細胞就一直失敗

細胞剛解完看起來非常圓

隔天可以看到約有三成細胞貼附，其他細胞多半死亡

換掉medium之後，再隔天可以看到有貼的細胞都有分裂

就在有點放心的時候，隔天就會突然全部死光，毫無預警



因為這批細胞很重要，我們特地買cell banker凍存液，也利用漸凍盒

每管細胞量都至少有 2x10^6 cells/mL

解凍細胞是直接把凍管放到37度C水浴一分鐘，補 medium 到 5mL

300g 離心 8 分鐘，再用新的 medium 回溶，隔天也一定會換 medium

用同一罐 medium 養細胞的老師養的有活

培養箱裡的其他細胞也都有活

就只有我的細胞沒有活......


請問有人有發生類似的情況嗎?


如果是一開始就凍壞，或是細胞在運輸的過程中升溫導致冰晶出現，

那細胞還會生長分裂嗎？

總是先分裂一陣子，讓我覺得沒事之後馬上死光光啊！！！！

還是有可能會是汙染嗎？

（但medium沒有變色、混濁等現象，顯微鏡下看也沒有不明物體)


拜託大家了

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推 cyc5566: 不要換medium試試看，或直接問老師他的步驟
→ chirpspeep: 老師用他的方式幫我做也解不開QQ
推 osla30: 37度後直接加medium培養別離心，隔天再換medium？
→ audry729: 不要離心+1，因為解細胞要快才行
→ Liat: 如果一定要離心，可考慮把medium增加到10ml再去離
→ chirpspeep: 謝謝各位幫忙，但我沒離心細胞還是出現一樣情況QQ
→ chirpspeep: 還是有活，但也是隔天馬上死掉QQ
推 qumai: 有聽過hybridoma存的時候細胞數不能太高的說法
→ qumai: 融合瘤不是浮游細胞嗎@@ 我養都不會貼
推 roc0860: 你的血清正常嗎
推 michealking: 不要離 解75T+10ML medium
→ chirpspeep: 我最後不離心、試了三種medium終於養起來了謝謝大家！
→ chirpspeep: 不過我的融合瘤會貼耶，但pipet就能把細胞打起來