[求救] E.coli表現R跟E表現量差異?

[mountain8110 (bugyellow)]

原PO最近在利用大腸桿菌表現重組蛋

白，遇到一點問題。

主要是利用pet22b載體在BL21菌株中，

分別表現兩段胺基酸序列，兩段序列高度

重複，除了將第一段裡面所有的E，

glutamate換成R，arginine以外。培養在

LB裡，以相同表現條件去表現OD600=0.6

時IPTG加至1mM誘導兩個小時，兩個蛋

白表現量卻差很多，有E的蛋白Band超

厚，有R的蛋白幾乎沒有表現。

原PO有去查一下，大腸桿菌合成R的

pathway主要是藉由E來產生(不確定是不

是真的，所以有E的蛋白表現量比R多還可

以接受，但R蛋白完全不表現卻不知道該

怎麼辦，有試過低溫拉長時間卻也沒什麼

用。

有去定序過了DNA序列是對的，同時E跟R

都是在所有codon裡表現機率最高的

codon，所以應該不是DNA序列的問題。

不知道各位大大有什麼建議? 像是在培養

液裡面添加什麼會比較好還是換個培養液

之類的?

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.70.12
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1469422252.A.E1F.html
→ Ianthegood: 看你的目的是什麼囉 如果只是要純化protein做in vitro
→ Ianthegood: 那就養10liter啊XD inclusion body裡有嗎
→ Ianthegood: 或是n端加一個tag有時候可以增加stability/solubility
→ Ianthegood: R很多嗎?
→ storm780121: 換其他strain? 或是codon plus的BL21?
推 vivitune: 降溫，不要在37度做表現。菌株的話先試試Rosetta,pLysS,
→ vivitune: 不行的話再試試takara系列的competent cell(會表達chape
→ vivitune: rone)
→ mountain8110: 感謝大家的建議 我先試試看一次養多一點好了
→ Ice9: 以前養過含R多蛋白的菌，是真的很難養多，得不停找條件。先
→ Ice9: 測低溫是不錯的選擇，然後不要養太久。
→ Ice9: 後來有學長是用同時表現 Arg-tRNA 的方式解決問題。
→ mountain8110: 那可以請教一下ice大 Arg-tRNA是有市售的菌株可以同
→ mountain8110: 時表現 還是是學長自己插進去的外源基因?
→ Ice9: V大說的 Rosetta 似乎就是特殊菌。印象中，學長是外送基因。
→ Ianthegood: 還有rosetta2 我現在express的protein裡面都是R跟K