transfer 過頭?

[pent (有人試我的密碼，幹)]

昨天傍晚跑了兩片8% SD-PAGE，
下班前，用濕式transfer，跑30V, 4C cold room, overnight
我們實驗室都這樣做transfer，都還蠻正常的。
但是今天白天來收的時候，發現PVDF上連prestained marker都看無
電極應該沒接反。
所以今天整天立刻重新配gel，8% SDS-PAGE  75V 跑約3小時
又做一次transfer, 趕時間所以改100V, 4C cold room, 1hour,
就在剛剛，打開一看，一片看的到marker, 另一片依然乾乾淨淨，
用ponceauS, 還真的很乾淨，
我們用的是 Amersham Hybond 0.45um PVDF
看板上之前的討論，會不會過頭好像是看孔徑，
請問這PVDF會容易跑過頭嗎?
不過印象中，以前也沒這樣過。
這次比較異常的是，以前我100V, 1hr, 結束後，buffer會還冰冰的
因為還放冰袋+周圍放一堆冰
但是這次有點溫溫熱熱的。也不知道會不會是tank有問題。
我們用完tank就只會用水沖一沖，還是要泡dd water??





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→ ad1980: 我都 110V 跑 110 minutes，不會過頭啊。有沒有可能你插
→ ad1980: 反了？
→ ad1980: 我 tank 也是水沖一沖而已
推 tz2733: buffer配錯?
推 tz2733: PVDF有過Methanol再用嗎?
推 tynse71864: gel有先泡 transfer bfr才夾三明治嗎
推 vivitune: 一片 membrane 跑90分鐘，原則上 membrane 1cm2 用1mA。
→ pent: 第二次確定沒放反，pvdf有用methanol先泡，在用transfer buf
→ pent: 洗過。30.3g glycine, 6.06g Tris-HCl, +200ml methanol
→ pent: 這應該沒錯吧
→ blence: 這配方濃度跟一般用的不同
→ utadalove: 是配1X? 跟一般用的buffer濃度多了兩倍量
→ pent: 配1L, 1x
→ pent: OMG, 我看錯了，這配方是2L的，感謝各位的幫忙