[求救] 銀染染色問題

[phoebe1620 (Phoebe)]

大家好，最近因為做GST pull down而需要用此染色法，我跑完膠先染coomassie blue，
看只有染到GST的蛋白，但看不到interacting protein，所以就接著染銀染，染之前先de
stain過了，我們實驗室用的牌子是Bio Rad的，因
為沒經驗所以步驟就照上面走，staining and developing也照上面染了20分鐘，後來才
知道這步驟不能太久，於是我就褪染再重新染一次，在旁邊看才幾秒鍾的時間，還沒看到
band整片就變色了(哭)，就只好報廢重新來過，後來去網路上查資料使用的容器要很乾淨
，如果克服這個問題，請問銀染過程還需要注意什麼問題呢?謝謝!

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※ 編輯: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 18:54:27
※ 編輯: phoebe1620 (140.112.72.46), 08/09/2016 19:14:01
→ Ianthegood: 先照protocol走過一次唄 銀染沒有退了再染的啦
推 tynse71864: 我是全用滅菌水 東西盡量當天現配 (kit我就不清楚了)
→ tynse71864: develop應該是蘇打水溶液 大概等到有顏色(你預期的地
→ tynse71864: 方)就可以停止了
→ tynse71864: 盡量跑0.75mm 的薄膠，太厚染的程度會不均
→ tynse71864: 另外有用 WB確認過interacting protein有被抓下來嗎？
→ tynse71864:  不然你染了半天沒東西也沒法下結論
→ phoebe1620: 謝謝各位的建議~我的protein是未知的，要做proteinID
→ phoebe1620: 的，所以無法用WB去看
推 tynse71864: 之後要打 MS的嗎? 那就忽略我最後一行 XD
→ tynse71864:  容器會全用 detergent洗過
→ phoebe1620: 是的~謝謝你的意見:)
推 LIAR: 莊榮輝沒用蘇打，用NaOH耶
推 tynse71864: 其實就是要鹼性環境，讓HCHO能在鹼性環境中把Ag+還原
→ tynse71864: 變成 Ag
推 LIAR: 我用莊榮輝步驟，泡完Ag+後，泡HCHO的竟然要超過一星期才
→ LIAR: 微微變嘿，我還是搞不懂問題在哪。結果只好回去用coomassie