[求救] western blot 重下不同二抗

[s992003 (Lord of Ethanol)]

各位大大早安，手機發文抱歉

小弟想問的是

小弟用anti his-tag的抗體偵測sf9細胞株
沒有進行蛋白質定量，大約使用90% T75的細胞數
使用BCIP+NBT呈色
有加長呈色時間，但是完全沒有band出現

但是聽說正常來說細胞做anti his-tag呈色都會有東西跑出來（學長姐之前做也是說會有
一些些雜band）

猜測二抗本身有些問題
原因是二抗上次用到剩下約3ul
感覺還可以做個幾次
但沒想到下次做實驗就乾了
小弟拿去稍微離心結果跑出大概30ul...
可能都是水了！？

想問說我這片膜還可以洗ㄧ洗再下一次新的二抗嗎

因為如果照理論的話我的樣品蛋白跟一抗還卡在膜上

不知道有沒有大大這樣做過

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.13.114.135
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1472428230.A.835.html
→ grox: 可以 只是算是偷懶方法（有次懶得stripping 直接下成功過）
→ lail: 可以啊，不過eppendorf從冰箱取出本來就要稍微spin down啊…
→ nellnell: Stripping也不用很久阿 大概10-15分鐘 再用TBST洗一下就
→ nellnell: 可以重新上抗體了
→ tynse71864: 直接上就好 第一次沒訊號表示根本沒抗體黏上去
→ jsi: 題外話，"正常來說細胞做anti his-tag呈色都會有東西跑出來"
→ jsi: 不是有特定表現His-tag protein的情況才可能會偵測到band嗎?
→ jsi: 所以一般細胞株偵測不到band應該才是正常的吧? @@?
推 FYT0429: 可以二抗直接上，stripping後從blocking開始也行