作者kenni3113 (小Q)
看板Biotech
標題[求救] 抽plasmid之後跑PCR確認，其位置亂跑
時間Mon Aug 29 17:24:27 2016
各位大大，小弟目前遇到問題
我把miRNA去與vector做ligation之後，去做transformation，不知為何只有養出3
個colony(養在含有AMP抗生素的LB agar中)，分別把3 colony去養在LB broth o/n，
隔天把3個菌液去抽plasmid，抽完plasmid的DNA去跑PCR確認其大小，發現跑出來的band
與ligation之後去跑PCR的band的位置很不一致。
ligation的target gene位置:200~250bp
抽plasmid的target gene位置: 900~950bp
請問這是問到怎樣的狀況才會導致經由養菌之後target gene位置會改變?
麻煩各位大大授業解惑一下
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→ Bows: shRNA? 08/29 18:52
推 Bows: 要不要把insert用限制酶切下來試試看 08/29 18:54
→ Ianthegood: 送定序 08/29 20:55
→ Eyer: 看看你的primer是不是黏到plasmid上啦～ 09/18 19:12
推 CD133: 你的vector是lentiviral vector嗎？如果是那請改用stbl3或H 09/23 19:59
→ CD133: B101之類的competent cell，以避免DNA重組的發生；如果不是 09/23 19:59
→ CD133: lentiviral vector，則注意colony是否特別小或特別大，有可 09/23 19:59
→ CD133: 能只是雜菌 09/23 19:59
→ greendeer: 用stbl1 competent cell看看呀 09/24 12:43