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各位前輩好 小弟最近在篩選轉型珠時不時會遇到一個問題 在此提出望有類似經驗者可以一起討論、解答 我將目標基因 以兩個序列不同的切位 放在帶有抗性基因的質體上 並轉型後藉由抗生素培養基進行篩選 但在含有抗生素的培養基上得到菌落後 對 14 顆菌落 Colony PCR 都沒有目標基因(Positive control 顯示 PCR 沒有問題) 同時我有做一個未放質體的轉型 Negative control 在抗生素培養基上沒有菌落,所以抗生素應該沒有問題 那就奇怪了@@ 請問有人有相關經驗嗎 謝謝 ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.4.209 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1472519842.A.C70.html
blence: 這很正常阿,那顆plasmid沒切乾淨 08/30 09:58
roy047: vector自接, 所以沒有insert 08/30 10:05
lail: colony PCR false negative,不死心就抽mini再做一次PCR 08/30 12:21
lyu0001: 一樓正解 還有insert 切不完全 加太少 也有可能 08/30 16:26
gryffin: 可是我有切膠純化,還是說還是有可能純化到沒切到的嗎? 08/31 00:58
Ianthegood: 個人經驗是 細菌會做很多亂七八糟我們還不知道的事 08/31 02:33
Ianthegood: 看你是想要把你的plasmid做出來 那就多做幾次XD 08/31 02:34
Ianthegood: 反正你只需要一顆對的 08/31 02:35
Ianthegood: 還是你想鑽進去研究可能發生什麼事情 也許下一個諾獎 08/31 02:35
Ianthegood: 就是你 08/31 02:36
Ice9: 用什麼RE?處理程序如何?RE端有多幾個bps? 08/31 06:58
gryffin: L大說的也是啦XD 08/31 22:06